樟芝子實體與菌絲體對預防阿茲海默症之功效探討

國立臺東大學／生命科學研究所／98／碩士

研究生:王聖恩

指導教授:李俊霖

轉載 : 臺灣博碩士論文知識加值系統

[ 摘要 ]

樟芝 (Antrodia camphorata) 為台灣特有的藥用真菌，其子實體常應用於各種疾病的治療，如食品及藥物中毒所引起的腹瀉腹痛，高血壓，皮膚癢和抗癌。類澱粉樣蛋白(amyloid B-peptide ，AB) 被證實與阿茲海默症 (Alzhemer’sdisease，AD) 形成病因有密切關係，AB 會於腦部中沉積造成氧化壓力與發炎反應使神經元受損，最終造成記憶學習能力的障礙。因此抗氧化能力與預防 AD 具有極高的相關性，許多動物試驗結果皆顯示樟芝於體內亦提供有良好的抗氧化效果，故篩選高效能的抗氧化能力萃取物將有助於獲得具預防 AD 之功效成分。

本研究以樟芝子實體、菌絲體萃取物做為試驗物質。分別以體外α, α-diphenyl-B-picrylhydrazyl（DPPH）自由基清除試驗評估抗氧化能力以及成分分析，再進行體外PC-12神經纖維母細胞存活率、抗氧化與抗發炎能力試驗，並於動物試驗以二十八天連續腦部輸注AB40建立AD模式大鼠以探討樟芝發酵產物對AD大鼠記憶學習能力之影響，以及分析樟芝發酵產物對AD大鼠大腦皮質與海馬迴組織中的抗氧化、抗發炎能力，和各表現蛋白沉積量與表現量。

本研究結果發現樟芝子實體比菌絲體多具有較高量的總黃酮與總酚含量。在DPPH自由基清除能力方面，以300Ug/mL時樟芝子實體水萃取物之清除能力為最強(p<0.05)。

在體外細胞試驗之結果顯示，濃度為 1.25 ppm 時，抑制 AB40的細胞毒性能力依強至弱順序為樟芝菌絲體水萃取物、lovastatin (正控制組)、子實體水萃取物、子實體乙醇萃取物、菌絲體乙醇萃取物 (p<0.05)。而當樣品濃度為 1.25 ppm 時，抑制 AB25-35 的細胞毒性能力依強至弱順序為子實體水萃取物、菌絲體水萃取物、子實體乙醇萃取物、菌絲體乙醇萃取物、lovastatin(p<0.05)。在對抗AB 誘發氧化與發炎反應之細胞試驗中，以 AB40 (187.5 nM)、AB25-35 (10 uM) 處理 PC12 細胞後會造成 malondialdehyde (MDA) 與reactive oxygen species (ROS) 濃度均顯著增加 (p<0.05)，但此 MDA 與 ROS 濃度的上升可因加入子實體與菌絲體水與乙醇萃取物 (1 ppm) 而有效的再度被降低，而又以子實體水萃取物效果更佳 (p<0.05)。 PC-12 細胞之 Tau 蛋白表現量會因AB40 之處理而大量表現。添加樟芝子實體水萃取物則有較為顯著降低 Tau 蛋白表現量的效果。在動物記憶學習試驗之結果顯示，餵食子實體與菌絲體的AD 大鼠可縮短參考記憶試驗與工作記憶試驗的搜尋時間 (p<0.05)，此外，子實體組更可在空間性探測試驗中延長於目標象限的搜尋時間 (p<0.05)。在腦部輸注AB的大腦皮質與海馬迴組織中發現 MDA 與 ROS 濃度均顯著增加(p<0.05)，但此 MDA 與 ROS 濃度的上升可因餵食子實體與菌絲體而有效的再度被降低 (p<0.05)。由大鼠大腦皮質與海馬迴組織之 AB40、BACE、Tau 蛋白表現量可發現，與 Normal 組比較，AB 組的大腦皮質組織中有大量 AB40、BACE、Tau 蛋白的表現量。餵食樟芝子實體組則有較為顯著降低 AB40、Tau 蛋白表現量的效果。由大腦皮質與海馬迴組織中 AB40、sAPPα 蛋白質沉積表現量可發現，與 Normal 組比較，AB組的大腦皮質組織中有大量 AB40 的沉積。餵食樟芝子實體組則有較為顯著降低 AB40 累積量的效果。Normal 組的大腦皮質組織中有大量 sAPPα 的沉積。Lovastatin 組及樟芝子實體組與AB組比較則有較為顯著提升 sAPPα 累積量的效果。