樟芝發酵液之抗發炎及其誘導癌細胞凋亡機制之探討

中國醫藥大學／營養研究所／92／碩士

研究生:賴鈺菁

指導教授:楊新玲／許游章

轉載 : 臺灣博碩士論文知識加值系統

[ 摘要 ]

樟芝 (學名Antrodia camphorata) 是生長在牛樟樹上的一種菇類，而牛樟樹為台灣特有。相傳樟芝具有解毒、抗腫瘤、抗過敏及降血糖等功能。

本研究之一是利用樟芝發酵液（Fermented culture broth of A. camphorata, FCBA）為材料，探討其對脂多醣 (Lipopolysaccharide, LPS)所誘發巨噬細胞(RAW 264.7)發炎反應之影響。研究發現，FCBA可抑制LPS (1ug/ml)誘發巨噬細胞所產生之一氧化氮(Nitric oxide) 含量。在蛋白質分析結果顯示其亦可有效抑制COX-2（cyclooxygenase-2）、iNOS (inducible nitric oxide synthase)的表現及IkB-α的降解作用。另一研究是以FCBA作用於人類急性骨髓血癌細胞(Human Premyelocytic Leukemia Cells，HL-60)及人類雌激素依賴型乳癌細胞（Human Estrogen-dependent Breast Cancer Cells, MCF-7）中，探討其抑制HL-60、MCF-7的細胞存活率及生長的情形及可能作用機制。

利用電子顯微鏡及DNA電泳法，發現FCBA可以誘導HL-60、MCF-7細胞凋亡，特徵包括細胞皺縮（cell shrinkage）、存活率(viability)下降和DNA斷裂（DNA fragmentation）；且隨FCBA處理濃度及作用時間的增加而增加。利用化學冷光法（chemiluminescence assay）去偵測FCBA作用於MCF-7上的活性氧化物（reactive oxygen species, ROS）變化，結果發現MCF-7之ROS量隨FCBA處理濃度的增加而增加。利用西方點墨法（Western blotting）偵測FCBA對HL-60、MCF-7細胞的Bcl-2、Bax和Cytochrome c表現，結果發現（1）HL-60的Bcl-2蛋白質受FCBA抑制而Bax蛋白質量增加，而MCF-7的Bax蛋白質有增加，但Bcl-2蛋白質並無顯著變化；（2）兩株癌細胞的Cytochrome c蛋白質合成量皆顯著增加。此外，（3）PARP皆可被切成兩片段(116和89 kDa)及（4）Caspase 3皆被活化。因此，樟芝會誘導癌細胞凋亡，推測是因ROS的產生，導致bax增加（及bcl-2減少），使cytochrome c被釋放而活化Caspase 3，進而使PARP被切斷的路徑所致。

總結以上結果，樟芝發酵液（Fermented culture broth of A. camphorata,FCBA）具有抗發炎、抗腫瘤之功效。