樟芝抗乳癌功效評估及其機制之探討

中國醫藥大學／醫學研究所碩士班／94／碩士

研究生:蔡佩娟

指導教授:張乃文

轉載 : 臺灣博碩士論文知識加值系統

[ 摘要 ]

樟芝(學名Antrodia cinnamomea)，是一種生長在牛樟樹上的蕈類，且為台灣特有的傳統中藥。先前的研究發現樟芝發酵液對雌激素依賴性乳癌細胞株MCF-7具有生長抑制且能誘導之細胞凋亡的作用，因此根據這些數據，我們將在本研究中探討有關樟芝發酵液(AC-10)對多種乳癌細胞株之細胞毒性及其可能作用之機制。

首先我們先檢測各種乳癌細胞株(MCF-7, MDA-MB-231, AU565 and BT474)之細胞存活率，結果發現以樟芝發酵液(AC-10)處理之乳癌細胞MCF-7與MDA-MB-231具有很強之細胞毒性，兩者之存活率都隨著AC-10作用的時間和濃度增加而下降，尤其是MDA-MB-231，其IC50 值約為136ug/ml，毒性較其他乳癌細胞株強，因此探討其可能的機制。為了確認AC-10對MDA-MB-231之影響，利用倒立式螢光顯微鏡、單細胞凝膠電泳法(Comet assay)及DNA梯狀圖譜進行分析，結果顯示AC-10可以誘導MDA-MB-231細胞凋亡，其特徵包括細胞皺縮 (cell shrinkage)、DNA之損傷及斷裂 (DNA fragmentation)，且隨著AC-10處理濃度及作用時間增加而增加。之後，我們又以西方點墨法(Western blotting)的方式偵測AC-10對MDA-MB-231細胞之細胞凋亡相關蛋白的影響，結果發現AC-10對MDA-MB-231誘導之細胞凋亡機制，會伴隨著細胞質中cytochrome c的增加，Bax/Bcl-2比率之上升，以及 procaspase-8, procaspase-9, procaspase-3 and poly(ADP)- ribosylpolymerase (PARP)之斷裂。另外，研究也發現在AC-10處理後之環氧化酶-2(cyclooxygenase-2；COX-2)蛋白表現及其產物PGE2 的生成都顯著的減少。然而，從西方點墨法與電泳遷移率變動實驗（Electrophoretic mobility shift assay， EMSA）中得知，AC-10會誘使MDA-MB-231細胞質中IkB-α蛋白被降解進而導致 NF-kB 的持續性活化而時間可長達24小時。

因此，這些數據說明樟之發酵液(AC-10)對MDA-MB-231乳癌細胞株之細胞毒性的機制，可能是以誘導其細胞凋亡的路徑所致，而研究中發現NF-kB長時間持續性活化可能會導致AC-10調控MDA-MB-231細胞以其他路徑調控細胞凋亡。最後本實驗提供的證據顯示，樟芝發酵液 (AC-10)可能具有其潛力發展成抑制乳癌細胞生長之藥劑的能力。