樟芝(AC-10)調控乳癌細胞之細胞週期與轉移之機制探討

中國醫藥大學／營養學系碩士班／95／碩士

研究生:陳皇琦

指導教授:楊新玲

轉載 : 臺灣博碩士論文知識加值系統

[ 摘要 ]

樟芝(Antrodia cinnamomea)是一種生長在牛樟樹上的蕈類，為台灣特有中藥，尤其具有抗腫瘤之功效。在本實驗室已證實樟芝發酵液(AC-10)具抗乳癌作用，會誘導乳癌細胞之細胞凋亡，但詳細機轉未探討。因此本論文將由細胞實驗 (in vitro)和動物實驗 (in vivo)兩方面來探討AC-10調控乳癌細胞株 (MDA-MB-231)細胞週期與轉移之機制。

在細胞實驗中發現AC-10在劑量與時間效應上皆會降低乳癌細胞之Cyclin D1、CDK4、Cyclin E、Cyclin A和PCNA蛋白表現，增加P27和P21蛋白表現，同時AC-10可經由活化JNK pathway調控Cyclin D1表現，使細胞週期停滯在G0/G1期。本研究亦探討AC-10對MMP-9、uPA、tPA、PAI-1、TIMP-2及VEGF等乳癌細胞轉移相關因子之影響。結果由西方墨點法得知AC-10可減少MMP-9、uPA和VEGF蛋白表現，但會增加PAI-1及TIMP-2蛋白表現，以zymography assay也發現MMP-9、uPA和tPA之酵素活性受到抑制。另外進一步利用酵素連結免疫吸附法發現AC-10可抑制VEGF及tPA的分泌量，但會增加PAI-1的分泌量。

在動物實驗方面，給予注射AC-10之實驗組其腫瘤顯著小於控制組，利用免疫組織染色發現腫瘤組織中調控細胞週期演進之蛋白Cyclin D1、PCNA其抗原性顯著低於控制組，而與轉移相關之PAI-1蛋白其抗原性顯著高於控制組。另外，免疫組織染色也觀察到實驗組腫瘤組織Bcl-2和COX-2之表現低於控制組，進一步利用TUNEL assay發現給予AC-10之實驗組有細胞凋亡情形。

綜合上述細胞實驗和動物實驗之結果，證實AC-10藉由調控乳癌細胞之細胞週期蛋白表現而誘導細胞週期停滯，進而導致細胞凋亡。在腫瘤轉移方面AC-10會影響乳癌腫瘤轉移之相關酵素表現與活性，來抑制癌細胞之轉移。因此AC-10在未來醫藥之應用上可望成為具潛力的抗乳癌藥物。